Экспресс диагностика сибирской язвы
Основным источником инфекции являются больные травоядные животные, от которых человек заражается при непосредственном контакте, алиментарным, аэрогенным или трансмиссивным путями. Чаще всего возникает кожная форма инфекции с образованием характерного сибиреязвенного карбункула в виде уголька (anthrax), реже – кишечная, легочная, септическая формы. Методы микробиологической диагностики сибирской язвы отражены в схеме 6.
Схема 6. Микробиологическая диагностика сибирской язвы
Материал: отделяемое карбункула или язвы, испражнения, моча, мокрота, кровь |
Серологический метод
Постановка РНГА, РА с целью определения антител в крови больного
Аллергодиагностика |
Выявление сибиреязвенного антигена | |||
Микроскопический метод.Мазки из исследуемого материала окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе, Ребитеру (капсула), а также люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой. Обнаружение в препаратах окруженных капсулой крупных грамположительных бацилл в виде цепочек дает возможность поставить предварительный диагноз сибирской язвы (рис.11 а). В качестве экспресс-метода диагностики применяется РИФ, с помощью которой выявляют характерные сибиреязвенные бациллы в виде палочек со светящимся желто-зеленым ободком (рис. 11 б.).
Бактериологический метод —посев исследуемого материала на МПА, кровяной агар в чашках Петри или PLET-arap с полимиксином В, лизоцимом, этилен-диаминотетраацетатом (ЭДТА) и ацетатом таллия. Контаминированный материал из внешней среды, от животных, из старых трупов предварительно прогревают при 63 °С в течение 15 мин с целью уничтожения вегетативных форм микроорганизмов. Посевы помещают в термостат на сутки. Через 20 —24 ч инкубации посевов при 370 С на МПА обнаруживают характерные шероховатые колонии в виде «головы медузы», края которых при малом увеличении микроскопа имеют вид вьющихся локонов или «львиной гривы» — рис. 12. В бульоне характерен придонный рост, напоминающий комочек ваты, при этом среда остается прозрачной. Из осадка делают мазок и препарат висячей капли. В мазке обнаруживают бескапсульные грамположительные стрептобациллы (расположение в виде длинных цепочек в виде «бамбуковой палки»). В отличие от других почвенных бацилл возбудитель сибирской язвы неподвижен. Для выделения чистой культуры типичные колонии пересевают на скошенный МПА.
Капсулообразование можно выявить путем биопробы или при посевах в бульон Хоттингера, на специальную среду, содержащую раствор Хенкса и 40 % стерильной сыворотки крупного рогатого скота, МПА с 0,7 % бикарбоната натрия, среду Буза (3%голодный агар с 15% дефибринированной крови барана), а также в дефибринированную лошадиную кровь. Посевы выращивают в течение 18-24 часов при температуре 370 С в атмосфере 5-7% СО2.
А б
Рис. 11. Возбудитель сибирской язвы(Bacillus anthracis). а — окраска по Граму, б – РИФ. х630
Рис. 12. Колония Bacillus anthracis. х56
Идентификацию выделенной культуры Bacillus anthracis (3-й день исследования) и ее дифференциацию от сходных непатогенных бацилл проводят путем посева уколом в желатину (разжижение в виде елочки, перевернутой вершиной вниз), изучения биохимических свойств, фаголизабельности и заражения животных. Определяют также чувствительность культуры к антибиотикам.
Одним из характерных признаков возбудителя сибирской язвы является тест «жемчужного ожерелья».На поверхность МПА в чашке Петри с 0,5 и 0,05 ЕД/мл пенициллина засевают 3-часовую бульонную культуру выделенного микроорганизма, через 3 ч инкубирования при 370 С готовят мазки, в которых при микроскопии находят «жемчужные ожерелья» в виде округлившихся стрептобацилл сибирской язвы. Почвенные бациллы сохраняют форму палочек, расположенных цепочками.
Биологические свойства возбудителя сибирской язвы и сходных с ним бацилл отражены в табл. 7.
Наличие сибиреязвенного антигенав разложившемся трупе животного, коже (свежей, сухой, выделанной) и изделиях из нее, шкурках, мехе, шерсти определяют с помощью реакциитермопреципитациипо Асколи.Исследуемый материал измельчают, заливают 10 —20-кратным объемом физиологического раствора, кипятят в течение 10-45 мин., после чего фильтруют. Полученный экстракт осторожно наслаивают на преципитирующую сибиреязвенную сыворотку в узкой преципитационной пробирке. На границе экстракта и преципитирующей сыворотки в течение 1- 5 мин в случае положительной реакции появляется кольцо белого цвета (преципитат). Контроли включают постановку реакций с заведомо положительной и отрицательной сывороткой, нормальной сывороткой и т.д.
Биопроба.Исследуемымматериалом подкожно заражают двух белых мышей., которые погибают через 24-48 ч после заражения. В мазках из внутренних органов и крови обнаруживают типичные капсульные бациллы. Проводится бактериологическое исследование трупа белой мыши с целью выделения чистой культуры сибиреязвенных бацилл.
Таблица 7. Дифференциально-диагностические признаки сибиреязвенной и других бацилл
| Признак | Вид микроорганизмов | |||||
| Bacillus anthracis | Bacillus cereus | Bacillus mycoides | Bacillus thuringiensis | Bacillus subtilis | Bacillus Megaterium | |
| Капсула | + | — | — | — | — | — |
| Подвижность | — | + | — | + | + | + |
| Гемолиз | — | + | — | + | — | + |
| Рост в анаэробных условиях | + | + | + | + | — | — |
| Лецитиназа | + | + | + | + | — | — |
| Аргининдегидролаза | — | V | V | + | — | — |
| Нитpaтpeдyктaзa | + | + | + | + | + | — |
| Патогенность для мышей | + | — | — | — | — | — |
| Ферментация до кислоты: | ||||||
| глицерина | — | V | + | + | + | + |
| маннита | — | — | — | — | + | + |
| салицина | — | V | + | + | + | + |
Обозначения: «-« — отрицательная; «+» — положительная; «V» — вариабельная реакции.
Серологический методвыполняетсяв тех случаях, когда не удается обнаружить возбудителя в материале. Для определения антител в сыворотке крови больного используют реакции латекс-агглютинации и РНГА с протективным сибиреязвенным антигеном.
Аллергический метод – постановка внутрикожной аллергической пробы с аллергеном сибиреязвенной бациллы — антраксином. Результаты учитывают через 24 ч. Пробу считают положительной при наличии гиперемии и инфильтрата диаметром более 15 мм.
Источник
39. ВОЗБУДИТЕЛЕМ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ЯВЛЯЕТСЯ
1) Corynebacterium diphtheriae
2) Bacillus anthracis
3) Klebsiella pneumoniae
4) Bacteroides fragilis
5) Pseudomonas aeruginosa
Правильный ответ 2
40. МОРФОЛОГИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) овоидные грамположительные палочки
2) мелкие грамотрицательные палочки
3) изогнутые грамотрицательные палочки
4) крупные с обрубленными концами грамположительные палочки
5) грамположительные палочки, имеющие форму веретена
Правильный ответ 4
41. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) факультативный анаэроб
2) облигатный анаэроб
3) капнофил
4) микроаэрофил
5) облигатный аэроб
Правильный ответ 1
42. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) требователен к питательным средам
2) не требователен к питательным средам
3) активно подвижен
4) окрашивается биполярно
5) кислотоустойчив
Правильный ответ 2
43. В БУЛЬОНЕ ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТЕТ В ВИДЕ
1) зернистого осадка
2) сталактитов
3) комочка ваты
4) мути
5) нежной серой пленки
Правильный ответ 3
44. НА МПА БАЦИЛЛЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТУТ В ВИДЕ
1) шероховатых R-колоний с волокнистой структурой («львиная грива»)
2) слизистых колоний в S-форме
3) нежных, прозрачных, голубоватых колоний
4) черных округлых колоний с металлическим блеском
5) вообще не растут
Правильный ответ 1
45. СПОРЫ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ МОГУТ СОХРАНЯТЬСЯ В ПОЧВЕ
1) не более месяца
2) не более года
3) неопределенно долго
4) погибают мгновенно
5) в почве не образуются
Правильный ответ 3
46. УСЛОВИЯ ОБРАЗОВАНИЯ СПОР БАЦИЛЛАМИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) +37°, приток О2, наличие питательных веществ
2) +42°, приток О2, наличие питательных веществ
3) +42°, отсутствие О2, дефицит питательных веществ
4) +18– 30°, приток О2, наличие питательных веществ
5) +18– 30°, отсутствие О2, дефицит питательных веществ
Правильный ответ 4
47. ОСНОВНОЙ ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
1) больной человек
2) грызуны
3) овцы и крупный рогатый скот
4) рыбы
5) бактерионоситель
Правильный ответ 3
48. ГЛАВНЫЕ ВХОДНЫЕ ВОРОТА ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
1) неповрежденная кожа
2) поврежденная кожа
3) конъюнктива глаз
4) слизистые оболочки дыхательных путей
5) слизистые оболочки ЖКТ
Правильный ответ 2
49. МЕТОД ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) кожно-аллергическая проба с антраксином
2) реакция иммобилизации с диагностической сывороткой
3) РИФ с исследуемой выделенной культурой
4) РИФ с исследуемым материалом
5) биологическая проба
Правильный ответ 4
50. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ОСНОВНОЙ ФОРМЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) кровь
2) испражнения
3) мокрота
4) экссудат карбункула
5) сыворотка
Правильный ответ 4
51. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
1) мокрота
2) экссудат карбункула
3) испражнения
4) кровь
5) всё вышеперечисленное
Правильный ответ 5
52. МАССОВОЕ ЗАБОЛЕВАНИЕ ЛЕГОЧНОЙ ФОРМОЙ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ – СВИДЕТЕЛЬСТВО
1) массового заболевания животных
2) низкого уровня охвата прививками
3) завоза из природного очага
4) вскрытия скотомогильника
5) биотеррористического акта
Правильный ответ 5
53. СИБИРСКАЯ ЯЗВА
1) антропонозная инфекция
2) зоонозная инфекция
3) воздушно-капельная инфекция
4) «болезнь грязных рук»
5) природно-очаговая инфекция
Правильный ответ 2
54. ОСНОВНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ ФОРМА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) бубонная
2) кожная
3) легочная
4) кишечная
5) септическая
Правильный ответ 2
55. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ПРИМЕНЯЮТ
1) живую вакцину EV
2) антраксин
3) живую вакцину СТИ
4) эритроцитарный сибиреязвенный диагностикум
5) антибиотики
Правильный ответ 3
56. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ИСПОЛЬЗУЮТ
1) антибиотики
2) сибиреязвенный бактериофаг
3) сибиреязвенную вакцину «СТИ»
4) противосибиреязвенный иммуноглобулин
5) антраксин
Правильный ответ 4
57. АНТРАКСИН
1) токсин
2) вакцина
3) аллерген
4) фактор патогенности
5) бактериофаг
Правильный ответ 3
58. ПЕРВЫЙ СОЗДАТЕЛЬ ЖИВОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) Н.Н. Гинсбург, А.Л.Тамарин
2) С.С. Андреевский
3) Л.С. Ценковский
4) И.Н. Ланге
5) Л. Пастер
Правильный ответ 5
59. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) крупные палочки
2) не образуют капсулу
3) не образуют спору
4) самые мелкие из всех микроорганизмов
5) не окрашиваются анилиновыми красителями
Правильный ответ 1
60. ВЕГЕТАТИВНЫЕ ФОРМЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) устойчивы к высоким температурам
2) устойчивы к обычным дезинфектантам
3) быстро гибнут при воздействии дезинфектантов и высоких температур
4) устойчивы к УФ-излучению
5) хорошо переносят высушивание
Правильный ответ 3
61. СПОРЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) устойчивы к антибиотикам
2) устойчивы к дезинфектантам
3) устойчивы к высоким температурам
4) хорошо переносят высушивание
5) все вышеперечисленное
Правильный ответ 5
62. СПОРЫ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ НЕОБРАЗУЮТСЯ
1) при 18-30°С
2) при притоке кислорода
3) в организме больного
4) на питательных средах
5) в почве
Правильный ответ 3
63. БАЦИЛЛЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В ОРГАНИЗМЕ
1) образуют только капсулу
2) образуют только спору
3) образуют и капсулу, и спору
4) подвижны
5) образуют L-формы
Правильный ответ 1
64. МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ СПОР БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) по Граму
2) метиленовой синькой
3) специальные методы (Ожешко, Тружильё и др.)
4) водным фуксином
5) окрасить невозможно
Правильный ответ 3
65. НА МПА КОЛОНИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТУТ В ВИДЕ
1) «битого стекла»
2) «ромашки»
3) «кружевных платочков»
4) «львиной гривы»
5) слизистой массы
Правильный ответ 4
66. НА МПБ БАЦИЛЛЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТУТ В ВИДЕ
1) сталактитов
2) комочка ваты
3) опрокинутой ёлочки
4) головы медузы
5) жемчужного ожерелья
Правильный ответ 2
67. «ЖЕМЧУЖНОЕ ОЖЕРЕЛЬЕ» БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ – ЭТО
1) бесспоровая форма
2) бескапсульная форма
3) протопласт
4) некультивируемая форма
5) споровая форма
Правильный ответ 3
68. ФАКТОР ПАТОГЕННОСТИ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) плазмокоагулаза
2) ДНКаза
3) токсин
4) спора
5) нуклеоид
Правильный ответ 3
69. ОСНОВНОЙ ПУТЬ ЗАРАЖЕНИЯ ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
1) алиментарный
2) контактный
3) воздушно-пылевой
4) трансплацентарный
5) трансмиссивный
Правильный ответ 2
70. ПРИ ПРОНИКНОВЕНИИ ЧЕРЕЗ КОЖУ НА МЕСТЕ ВНЕДРЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В ИТОГЕ ОБРАЗУЕТСЯ
1) бубон
2) карбункул
3) небольшое покраснение
4) пузырек с серозной жидкостью
5) рубец
Правильный ответ 2
71. РАБОТА С МАТЕРИАЛОМ, ПОДОЗРИТЕЛЬНЫМ НА ЗАРАЖЕНИЕ БАЦИЛЛАМИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ, ПРОВОДИТСЯ
1) в обычных лабораториях
2) в бак. лабораториях медицинских вузов
3) в специализированных лабораториях, имеющих специальное разрешение
4) только в полевых условиях
5) только в г. Москве
Правильный ответ 3
72. МЕТОД ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) микроскопический
2) бактериологический
3) биологический
4) иммунофлюоресцентный
5) серологический
Правильный ответ 4
73. ЦЕЛЬ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ТЕРМОПРЕЦИПИТАЦИИ АСКОЛИ ПРИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) изучение биохимической активности микроорганизмов
2) обнаружение сибиреязвенного антигена в исследуемом материале
3) обнаружение антител в сыворотке обследуемого
4) изучение антигенной структуры возбудителя
5) обнаружение токсина в сыворотке обследуемого
Правильный ответ 2
74. МАРКЕР ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ПРИ ПОСТАНОВКЕ РЕАКЦИИ ТЕРМОПРЕЦИПИТАЦИИ АСКОЛИ
1) протективный антиген
2) белковый капсульный антиген
3) полисахаридный соматический антиген
4) отёчный фактор
5) летальный фактор
Правильный ответ 3
75. МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) бактериоскопический
2) бактериологический
3) биологический
4) аллергический
5) все вышеперечисленные
Правильный ответ 5
76. СПОРЫ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В БОЛЬШИХ КОЛИЧЕСТВАХ МОЖНО ВЫЯВИТЬ В
1) почве
2) воде
3) воздухе
4) скотомогильниках
5) овощехранилищах
Правильный ответ 4
77. ДЛЯ ПАТОГЕНЕЗА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ХАРАКТЕРНО
1) прорастание спор в вегетативные клетки
2) гематогенное и/или лимфогенное распространение в организме
3) местный некроз и отек тканей
4) интоксикация
5) все вышеперечисленные
Правильный ответ 5
78. ОСНОВНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ ФОРМА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В СЛУЧАЕ ПРИМЕНЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ, КАК СРЕДСТВА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ
1) кожная
2) легочная
3) кишечная
4) септическая
5) бубонная
Правильный ответ 2
Источник
Оглавление темы «Возбудитель сибирской язвы. Клинические проявления заражения сибирской язвой. Bacillus cereus.»: Микробиологическая диагностика сибирской язвы. Принципы микробиологической диагностики сибирской язвы. Бактериоскопический, бактериологический, биологический, кожно-аллергический метод диагностики сибирской язвы.Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы. При патологоанатомическом исследовании забирают кусочки органов или целые органы. Все образцы следует помещать в герметичные сосуды и транспортировать закупоренными в опломбированные боксы или деревянные ящики. Выделение возбудителя сибирской язвы. Проводят окраску материала по Граму и посев на обычные питательные среды. Затем определяют подвижность микроорганизмов из выросших колоний, изучают их биохимические и культуральные свойства. Серологические исследования проводят для распознавания больных и реконвалесцентов. Возбудитель сибирской язвы можно выявлять AT, меченными флюоресцеинами (особенно в смешанных культурах), диффузией в геле, в РСК, РИГА и ИФА. Кожные пробы применяют для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях. Проводят внутрикожное введение 0,1 мл бактериального аллергена (антраксина).
Реакция термопреципитации по Асколи имеет большое значение, так как позволяет идентифицировать возбудителей сибирской язвы при отрицательных результатах бактериологических исследований. Для прижизненной же диагностики эта реакция не имеет серьёзных преимуществ перед вышеуказанными бактериологическими и серологическими методами. Фаготипирование сибирской язвы. Для дифференциальной диагностики предложены высокоспецифические литические сибиреязвенные бактериофаги «ВА-9» и «Саратов». Биологическая проба при диагностике сибирской язвы. Заражение лабораторных животных проводят одномоментно с посевом на питательные среды. Материал можно вводить белым мышам (по 0,1-0,2 мл в спину), кроликам и морским свинкам (по 0,2-0,5 мл в область живота). Обычно мыши погибают через 1-2 сут, морские свинки и кролики— через 2-4 сут. При выживании животных наблюдение за ними продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезёнку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца и места введения заразного материала. Затем проводят посев исследуемого материала на питательные среды. — Также рекомендуем «Лечение сибирской язвы. Профилактика сибирской язвы. Иммунопрофилактика сибирской язвы. Ветеринарно-санитарные меры профилактики сибирской язвы. Санитарный надзор за сибирской язвой.» |
Источник